组织自发荧光淬灭剂（双组分）说明书
货号：P01665
规格：5mL
保存：RT保存，有效期12个月
产品介绍：
组织内的红细胞以及胶原蛋白和弹性蛋白等各种物质或者醛类固定剂导致的交联复合物在强度较高时会干扰荧光抗体的判断，荧光淬灭剂可以通过物理覆盖或电子屏蔽，减小自身荧光对抗体信号的干扰。荧光淬灭剂并不能完全消灭自发荧光，但可以大幅降低自发荧光背景，使目的靶标被特异性显色，显著提升大多数免疫荧光检测中的整体信噪比。
同时，由于每一种淬灭剂只能针对特定的自发荧光物质进行屏蔽，因此不同的抗体、不同的组织都需要根据情况来选择合适的淬灭剂。
产品内容：
产品内容 | 规格 |
组织自发荧光淬灭剂A液 | 5mL |
组织自发荧光淬灭剂B液 | B1 2mL |
B2 2mL | |
B3 2mL |
使用方法：
本试剂盒分为AB两个组分，独立工作，针对不同的自发荧光物质，请先通过预实验观察是否适用于样本组织。可以只使用AB一种，也可以同时使用。
步骤一、
溶液A主要用于屏蔽脂褐素引发的强烈自发荧光斑点，主要成分SBB 通过与脂褐素疏水脂核结合→物理遮蔽+能量转移，淬灭>90%以上的脂褐素自发荧光。红色亮点消失 。但是SBB在红光区（比如cy3）具有少量红色荧光特性，弥漫红色背景，全片均匀覆盖，如果目的蛋白是高表达、红色荧光非常亮，不妨碍特异性染色的识别， 如果要做低表达蛋白的红色定量建议更换其他颜色荧光。在大于700nm具有较强背景荧光，不能用SBB。
组织切片在经过抗原修复以后，封闭之前滴加溶液A，完全覆盖切片，约100-200uL，避光孵育90 min。PBS 漂洗四次，封闭，孵育抗体。
注意：溶液A处理后，封闭液、抗体稀释液、所有洗涤液中均不得含 Triton X-100、Tween-20 或 SDS等去污剂。
步骤二、
溶液B分为三个组分，每张标准组织切片约需要 150 μL 溶液B（即 50 μL B1 + 50 μL B2 + 50 μL B3）使用时先取适量B1与等体积B2充分混合均匀，然后加入B3混匀。该混合物室温下两小时有效，需要立即使用。在免疫荧光染色全部完成后进行，滴加该工作液孵育 2-5 分钟。PBS 缓冲液洗涤 5 分钟，甩掉切片上多余缓冲液。滴加封片剂前尽量去除组织周围多余液体，以获得最佳结果，抗荧光衰减封片剂滴加到组织切片上封片后可立即观察。封片后普通光镜下可见切片被染成蓝色，但不会影响荧光信号。
可选步骤：
DAPI 5μg/mL in PBS染色10 分钟，或直接用含有dapi的封片剂封片。
建议使用我公司普通型抗荧光衰减封片剂，以达到最佳信噪比。不要使用增强型抗荧光衰减封片剂，否则可能导致淬灭效果减弱，背景信号增强。
注意事项：
1、本实验仅使用 PBS 清洗，不可替换为 TBS、HEPES 或其他缓冲液。
2、建议先做空白对照，未染色切片（不施加任何检测试剂）确定自发荧光程度。再做阴性对照，在相邻阴性对照未染色切片上，用淬灭剂孵育，观察淬灭效果。同时优化一抗稀释度，以达到最佳信噪比。